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用这些主动电泳东西丢弃你的琼脂糖

让咱们面临现实,  凝胶电泳是一种疾苦。它须要建造缓冲液,浇注凝胶,加载孔,跟踪它们的迁徙,成像和记实成果并处置数据 - 而后处置有毒废料 - 一切这些都要评价一些大份子的绝对迁徙。预制凝胶和预制缓冲液使任务变得轻易一些,但很多研讨职员依然接待在核酸(和卵白质)阐发任务流程中完成更多主动化。此刻,由于主动凝胶电泳体系,他们能够或许或许获得它。

主动化的长处

几种  贸易体系能够或许或许使运转凝胶所需的一些或一切步骤主动化。与平板凝胶电泳一样,这些体系支配了大份子呼应电场而经由过程晶格网状凝胶差别迁徙的偏向。安捷伦科技公司营销和撑持司理Knut Wintergerst表现,在很大水平上,主动电泳能够或许或许完成平板凝胶的巨细测定,定量,寻觅完全性/杂质和DNA片断阐发。

但是,在大大都环境下,这些网状物包罗在狭小的外壳内,比方玻璃或聚合物毛细管或微流体通道。当大份子穿过凝胶时,它们会拾取荧光染料,使仪器的光学体系能够或许或许在它们颠末时检测到它们。这使研讨职员能够或许或许当即检查分手,并当即主动记实和数字化存档。21 CFR Part 11合规包凡是可用。

此类仪器还具备手动支配时候,整体速率,易用性,再现性和/或样品请求等额外上风 - 在某些环境下,只要1μl的5 pg /μlDNA溶液就充足了。

另外,诸如Agilent 2100生物阐发仪等仪器可用于丈量利用平板凝胶没法完成的RNA完全性评价,Wintergerst说。“RNA是一种很是懦弱的份子,”他说。“在你将RNA转录成cDNA之前,你须要确保它具备杰出的品质。”2100生物阐发仪软件将神经收集算法利用于从电泳图中提取的各类参数(由仪器天生的数字轨迹)评价样品的完全性,为其指定1**10的RNA完全性品级(RIN)评分,此中10表现高品质样品,1或2表现高度降解的RNA。RIN已成为行业规范; 尔后,其余RNA完全性评分算法也获得了成长,并且凡是会采用很大的疾苦来证实它们与RIN的相干性(比方, Bio-Rad Laboratories的Experion™ RNA品质目标,RQI)。

主动化

一些主动电泳体系,如Bioanalyzer和Experion,能够或许或许同时处置十几个或更少的样品,并且根基上能够或许或许从装载平板凝胶的统一点主动化。对这些,将凝胶(筛分聚合物)/染料夹杂物在压力下压入微流体芯片的通道中,而后将样品手动移液到孔中。施加电压后,样品经由过程芯片的架构传输。试剂盒 - 包含具备差别外部构型的凝胶,试剂和芯片 - 设想用于差别尺寸规模的DNA,规范或高分辩率甚**卵白质分手。

其余仪器成立在多重毛细管电泳(CE)平台上,对Qiagen的QIAxcel**体系,“针对一切天天停止12次以上样品的客户,”产物司理SebastianBühren说。经由过程迭代利用12毛细管阵列和主动进样器,QIAxcel无需野生干涉干与便可处置多达96个样品。其余主动化CE仪器,如Advanced Analytical Technologies的Fragment Analyzer™,能够或许或许利用12或96毛细管阵列采办。此类体系凡是能够或许或许从微管或96孔板采样,并且很多体系具备内置主动采样功效或设想为机械人兼容。

另有一些,比方PerkinElmer的LabChip®体系,利用主动毛细管“吸管”将样品从多达384孔板加载到微流控芯片上。

主动化板坯

对Life Technologies的E-Gel®体系,“其主动化局部是全部下游工艺,”**产物司理Mazen Karaman诠释道。该装配能够或许或许放在主动化平台上,由于48孔或96孔板的E-凝胶是枯燥的并且用塑料包裹,它们能够或许或许经由过程机械人夹具支配。卡拉曼补充说,由于井的界说很是明白,是以很轻易将它们映照到主动化平台上停止主动装载。

固然E-Gel上凡是须要比基于微流体或CE的体系更大的样本量,但现实上这能够是一种资产。经由过程使带进入第二个暗语孔能够或许或许收受接管纯化的样品。由于当样品进入第二个孔时E-凝胶是枯燥的,以是能够或许或许将其移液到水,TE或其余缓冲液中。

另有较小的12通道E-Gels可用于样品收受接管。这些凝胶能够或许或许在运转时利用配套灯箱和相机设置主动成像。(Lonza的FlashGel是一个近似的体系。)卡拉曼说,研讨职员并不偏向于用机械人手艺主动化这些小型体系。

电子凝胶体系的本钱本钱与传统的平板凝胶钻机相称,其耗材本钱与预制凝胶大抵不异。另外一方面,微流体和CE体系须要**少10,000美圆和耗损品的本钱收入。(Bühren称其为“现场**自制的”QIAxcel耗损品,每一个样品起价为30美分**1美圆,详细取决于利用。)

在计较主动电泳体系的价钱时,叨教:甚么价钱时候?甚么价钱精确?甚么价钱再现?而后决议是不是值得破费。

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